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実験プロトコル

免疫染色 １．4μmの切片を作製 ２．脱パラフィン・親水化 ３．抗原賦活処理 　　１）抗原賦活液としてpH6.0-7.0クエン酸バッファーを耐熱性のドーゼに入れ、オートクレーブで121℃　15分間熱処理 　　２）熱処理後、染色ドーゼを常温で40分間放置 　　３）スライドを取り出し、PBSにて5分間3回洗浄 ４．内因性ペルオキシダ-ゼのブロッキング 　　１）0.3%過酸化水素加メタノール20分間浸漬 　　２）PBSで5分間3回洗浄 ５．一次抗体反応 　　１）抗体希釈液用緩衝液（1%BSA-PBS、0.1％アジ化ナトリウム）で希釈した一次抗体＊を切片上に滴下 　　＊抗体使用推奨濃度：5μg/mL〜50μg/mL 　　２）室温 2時間、または4℃で一晩反応 　　３）PBSで切片上の一次抗体を洗い流し、PBSに5分間3回浸漬 ６．二次抗体反応 　　１）シンプルステインMAX-PO MULTI (ニチレイ) を使用。室温で1?2時間反応 　　２）PBSで切片上の試薬を洗い流し、PBSに５分間3回浸漬 ７．発色基質溶液 　　１）0.05Mトリスバッファー(TBS) 100mlに対して10mgDABと10μl過酸化水素を加え、常温、5分間反応 　　２）流水でよく洗浄 ８．核染色 　　必要に応じてヘマトキシリン、メチルグリーン**などで染色する 　　＊＊ヘマトキシリンを使用する場合は、短時間で染色する ９．封入